Библиотека, читать онлайн, скачать книги txt

БОЛЬШАЯ БИБЛИОТЕКА

МЕЧТА ЛЮБОГО


Простые методы окраски микроорганизмов

Простые и сложные методы окраски микроорганизмов. Способы окраски спор, жгутиков, капсул, включений. Для окрашивания препаратов пользуются кислыми, щелочными и нейтральными анилиновыми красителями. Наиболее широкое применение нашли основной и кислый фуксин, метиленовый синий, генцианвиолет и везувин. Простой способ окраски мазков производится водным фуксином Пфейффера и метиленовым синим Простые методы окраски микроорганизмов. Готовят водный фуксин простые методы окраски микроорганизмов фенолового фуксина Циля, разводя его дистиллированной водой в соотношении 1:10. Состав РАСТВОРА ФУКСИНА ЦИЛЯ: основной фуксин — 1 г; спирт этиловый 96 % — 10 мл; фенол кристаллический — 5 г; глицерин — несколько капель; вода дистиллированная — 100 мл. Простые методы окраски микроорганизмов синий Леффлера готовят, прибавляя к 30 мл насыщенного раствора метиленового синего 10 г метиленового синего в 100 мл 96 % этилового спирта 1 мл 1% NaOH или KOH и 100 мл дистиллированной воды. После окрашивания красители сливают, препарат промывают водой и высушивают между листками фильтровальной бумаги. На сухой мазок наносят каплю масла и микроскопируют с использованием иммерсионного объектива оптического микроскопа. Способность микробов воспринимать красители называется тинкториальными свойствами. При окраске щелочным метиленовым синим по Леффлеру 3—5 мин гранулы волютина у дифтерийных коринебактерий приобретают темно—синий, а палочка — голубой цвет. При сложных методах окраски мазков применяют два—три различных по цвету красителя, что позволяет дифференцировать микробы и выявить некоторые нюансы в деталях их строения. К таким методам относят окраску по Граму, Цилю—Нельсену, Нейссеру, Бурри—Гинсу, Романовскому—Гимзе и некоторые другие. При окраске по НЕЙССЕРУ гранулы ВОЛЮТИНА у дифтерийных коринебактерий окрашиваются в сине—черный, а бактерия — в простые методы окраски микроорганизмов цвет. Простые методы окраски микроорганизмов окрашивают: 1 1 мин уксуснокислым метиленовым синим метиленовый синий — 0,1 г, спирт — 2 мл, ледяная уксусная кислота простые методы окраски микроорганизмов 5 мл, дистиллированная вода — 100 мл ; 2 сливают краситель и мазок промывают водой; 3 на 20— 30 с наносят раствор Люголя; 4 1 —3 мин окрашивают везувином прокипяченная и отфильтрованная взвесь 2 г везувина в смеси 60 мл спирта и 40 мл дистиллированной воды. Количественное содержание ПЕПТИДОГЛИКАНА, содержащегося в стенке, определяет характер окраски бактерий и других прокариот по ГРАМУ. Те из них, которые содержат в клеточной стенке большое его количество около 90 % пептидогликанаокрашиваются по Граму в сине—фиолетовый цвет их простые методы окраски микроорганизмов грамположительными, все другие, содержащие простые методы окраски микроорганизмов оболочке 5—20 % простые методы окраски микроорганизмов, — в розовый цвет их называют грамотрицательными. Толщина слоя пептидогликана в клеточной стенке грамположительных бактерий в несколько раз больше, чем у грамотрицательных. Техника окраски по Граму: 1. Фиксированный мазок 1—2 мин окрашивают раствором генцианвиолета генцианвиолет — 1 г, этанол 96 % — 10 мл, фенол кристаллический — 2 г, вода дистиллированная — 100 мл; по методу Синева его покрывают пропитанной тем же красителем полоской фильтровальной бумаги, которую смачивают 2—3 каплями воды. Простые методы окраски микроорганизмов генцианвиолет сняв полоску бумаги Синевамазок 1 мин обрабатывают раствором Люголя и, не промывая водой, сливают его. Обесцвечивают спиртом в течение 0,5 мин, промывают водой. Окрашивают 1—2 мин фуксином Пфейффера. Мазок ополаскивают водой и высушивают. Для выявления грамположительных КИСЛОТО— И СПИРТОУСТОЙЧИВЫХ микобактерий туберкулеза и лепры, которые из—за большого количества в клеточных оболочках жировосковых веществ, миколовой кислоты и других оксикислот непроницаемы для разведенных растворов красителей, используют окраску по методу ЦИЛЯ — НИЛЬСЕНА. Окрашивание их по этому способу достигается при помощи концентрированного фенолового фуксина Циля с подогреванием над пламенем горелки до закипания и отхождения паров. Окрашенные с применением термокислотной обработки простые методы окраски микроорганизмов не обесцвечиваются слабыми растворами минеральных кислот и этилового спирта. Фиксированный мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, на которую наносят фуксин Циля, и несколько раз подогревают над пламенем горелки до простые методы окраски микроорганизмов паров, подливая краситель, далее бумагу снимают и промывают простые методы окраски микроорганизмов. Препарат обрабатывают обесцвечивают 5 % раствором серной кислоты и промывают водой. На мазок наливают водно—спиртовой раствор метиленового синего, спустя 3—5 мин промывают водой и высушивают. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в интенсивно красный цвет, остальные виды микробов, обесцвечивающиеся в процессе обработки препарата кислотой, — в светло—синий. При необходимости дифференциации возбудителей лепры от микобактерии туберкулеза используют окраску мазков по методу Семеновича—Марциновского — микобактерии лепры окрашиваются в красный цвет, а микобактерии туберкулеза остаются неокрашенными. Для обнаружения КАПСУЛ бактерий, плохо воспринимающих красители, используют метод БУРРИ—ГИНСА: в каплю туши, разведенной в 10 раз водой, вносят исследуемые бактерии и равномерно распределяют их петлей по предметному стеклу; мазок высушивают, фиксируют наносят 2—3 капли спирта и сжигают его на стеклеокрашивают в течение 3—5 мин фуксином Пфейффера, промывают водой, высушивают; на темном фоне препарата капсулы видны в виде светлых ореолов вокруг красных бактерий. О наличии ЖГУТИКОВ чаще всего судят по направленному характеру движения бактерий в раздавленной и висячей каплях. Но можно использовать и некоторые методы окраски, например по МОРОЗОВУ: 1 обработка препарата кислотой, при этом оболочки и жгутики разрыхляются; 2 закрепление разрыхленных структур простые методы окраски микроорганизмов 3 обработка азотнокислым серебром, оно окутывает каждый жгутик и саму толстым слоем, давая различные оттенки от жёлтого до тёмно-коричневого. Эндоспоры бактерий выдерживают длительное кипячение, действие горячего воздуха 140—150°С и химических дезинфицирующих веществ, многие годы сохраняются в почве, на растительности и предметах. Попадая в организм человека и животных, споры патогенных бактерий прорастают в материнские клетки за несколько часов. Водным фуксином, водно—спиртовым метиленовым синим и по Граму эндоспоры не окрашиваются, так как их плотная многослойная оболочка непроницаема для обычных красителей. В мазках из патологических материалов, культур бацилл и клостридии, окрашенных простыми красителями, споры выглядят в виде бесцветных телец внутри окрашенных в соответствующий цвет вегетативных клеток или вне их. Окрашивать их можно по методу Циля—Нельсена, используя для обесцвечивания мазков после обработки их фуксином Циля не 5%, а 1% серную кислоту. При этом эндоспоры, так же как микобактерии туберкулеза, красятся в розовый цвет и будут хорошо видны на синем фоне бактерий. Для окрашивания спор можно использовать метод по ОЖЕШКО: 1 протравка оболочки споры горячей кислотой; 2 окраска по Цилю—Нильсену. Краска состоит из смеси простые методы окраски микроорганизмов, эозина и метиленовой сини. Окрашивает ЦИТОПЛАЦМУ в голубой, а ЯДРА в красно—фиолетовый цвет. Этот метод позволяет обнаружить различные цитологические детали. Мазок для люминесцентной микроскопии готовят обычным образом, фиксируют в ацетоне и наносят на него флюорохром на 20—30 мин. Сделанный препарат промывают проточной водой, покрывают покровным стеклом и микроскопируют.



copyright © borsa55.ru